Development and validation of analytical methods by HPLC for quality control of avermectins and milbemycins in bulk samples

This work aims to develop analytical methods using high-performance liquid chromatography with a diode array detector (HPLC-DAD) for analysis and quantification of avermectins (AVMs) and milbemycins (MBMs) in bulk samples. First, the methods were optimized and some parameters such as temperature, flow rate, injection volume and mobile phase with different proportions of solvents were evaluated. The best chromatographic conditions were obtained using the Phenomenex® C18 (150 × 4.60 mm, 5 µm) column at a temperature of 20 °C, flow rate of 1.2 mL min-1, injection volume of 20 µL, and detection at 250 nm. Acetonitrile: ultrapure water (87: 13, v/v) was used as mobile phase for moxidectin and eprinomectin, and acetonitrile: methanol: ultrapure water (53: 35: 12, v/v/v) for abamectin and ivermectin. Under these conditions satisfactory results were obtained, with appropriate limits of detection and quantification, acceptable linearity, precision, accuracy, and robustness. These methods satisfy the need for analytical methods for the multi-determination of MBMs and the B1a and B1b forms of AVMs by HPLC-DAD, which can be considered simple, effective, innovative and should aid in the development of the fiel

Research progress of avermectins in anti-tumor / 国际肿瘤学杂志

Avermectins can affect biological processes of multiple tumor, including tumor cell proliferation and metastasis, cell cycle arrest, induction of apoptosis and autophagy, regulation of tumor microenvironment and tumor stem cells. Avermectins can be administered alone or combined with chemotherapeutic drugs to reverse multidrug resistance. To further explore the anti-tumor mechanism of avermectins will provide reliable experimental and theoretical guidance for future clinical application.

Avaliação da atividade da enzima glutationa-s-transferase da minhoca Eisenia foetida exposta à ivermectina / Evaluation of glutatione-s-transferase enzyme activity of the earthworm Eisenia foetida exposed to ivermectin

Muitos tipos de drogas são usados na medicina veterinária para controlar e melhorar a saúde animal através de tratamentos terapêuticos e profiláticos. A desvantagem desta prática é que os produtos farmacêuticos e seus metabólitos são liberados no ambiente e podem influenciar a fauna do solo através da excreção do esterco ou pela posterior aplicação ao campo agrícola. As avermectinas são vastamente utilizadas na medicina veterinária e na agricultura. Estudos anteriores demonstraram que a ivermectina (IVM), um parasiticida amplamente utilizado, é muito tóxico para diversas espécies de invertebrados não-alvo. Tendo em vista que a IVM é pouco metabolizada, excretada de forma relativamente inalterada e pela escassez de dados sobre a toxicidade aos invertebrados do solo, foram investigados, neste estudo, os efeitos agudos e crônicos deste parasiticida sobre a glutationa-s -transferase (GST) da oligoqueta Eisenia foetida. As minhocas Eisenia foetida foram expostas à concentrações de IVM a 0, 1, 5, 10, 50 e 100 mg kg-1, e as amostras foram tomadas nos dias 7, 14 e 28 para determinação da atividade da GST. Os resultados mostraram que a duração da exposição alterou significativamente os efeitos do parasiticida investigado sobre a atividade de GST. Especificamente, após uma redução inicial, o prolongamento da exposição causou a indução da atividade da GST. Com o aumento da concentração de IVM, as atividades da GST foram inibidas significativamente após 7 dias de exposição. Em particular, o efeito inibitório foi significativo nas concentrações mais elevadas de tratamento (10, 50 e 100 mg kg-1). Por outro lado, aos 14 e 28 dias foram observadas induções na atividade da enzima. A atividade da GST pode ser considerada como parâmetro sensível para avaliar a toxicidade da ivermectina para minhocas.

Many types of drugs are used in veterinary medicine to control and improve animal health through therapeutic and prophylactic treatments. The disadvantage of this practice is that pharmaceuticals and their metabolites are released into the environment and may influence soil fauna through manure excretion and subsequent application to agricultural field. The avermectins are extensively and increasingly used in veterinary medicine and agriculture. Previous studies have shown that ivermectin (IVM), a widely used parasiticide, is very toxic to many non-target invertebrate species. In view of the little metabolism and most of the ivermectin dose given to the animal is excreted, relatively unaltered, primarily in the feces and the scarcity of data on toxicity to soil invertebrates, acute and chronic effects of the parasiticide on the glutatione-s-transferase (GST) of the oligochaete Eisenia foetida were investigated. Earthworms of Eisenia foetida were exposed to IVM at 0, 1, 5, 10, 50 and 100 mg kg-1 concentrations; samples were taken at days 7, 14, and 28 exposure for determination of GST activities. The results showed that duration of the exposure significantly changed the effects of the investigated parasiticide on the GST activity. Namely, after the initial decrease, the prolongation of exposure caused the induction of the GST activity. With increasing IVM concentration, GST activities were inhibited significantly after 7 days of the exposure. In particular, the inhibition effect was significant at the higher treatment levels (10, 50 and 100 mg kg-1). On the other hand, at 14 and 28 days were observed inductions of enzyme activity. GST activity can be regarded as sensitive parameter for evaluating the toxicity of ivermectin to earthworms.

Efficacy of oral doramectin as treatment for Psoroptes ovis and Leporacarus gibbus in naturally infested rabbits / Eficácia de doramectin no tratamento oral para Psoroptes ovis e Leporacarus gibbus em coelhos naturalmente infestados

The present study evaluated the efficacy of a single oral dose of doramectin in the control of Psoroptes ovis and Leporacarus gibbus in naturally infested rabbits. Sixteen adult rabbits were selected and distributed in two experimental groups. The treated group received 200 µg/Kg of oral doramectin and the control group received the same volume of saline solution. The diagnosis of the mites was made with a stereoscopic microscope. Hairs from the dorsal part of the neck, lumbar right, lumbar left, ventral side of the tail and ventral abdomen were evaluated for L. gibbus, and ear wax evaluated for P. ovis. The evaluation of the efficiency and the clinical assessment of the lesions was made in days 0, +3, +7, +14, +21, +28, and +35 after treatment. An efficacy of 75% and 87,5% was observed for L. gibbus in days +3 and +7 after treatment, an efficacy of 100% was observed in days +14, + 21, +28 e +35. An efficacy of 100% for the control of P. ovis was observed following day +7. The clinical lesion score of the control group remained unaltered, except for one animal which conditions worsened during experimentation. In the treated group animals, regression of the lesions was observed following day +3, and on day +21 no signal of infestation by P. ovis was present. None of the animals from the treated group presented secondary collateral effects caused by the doramectin, which proved itself as an optimal alternative for mite control in naturally infested rabbits.(AU)

O objetivo do trabalho foi avaliar a eficácia da doramectina administrada por via oral no controle de Psoroptes ovis e Leporacarus gibbus em coelhos naturalmente infestados. Foram selecionados 16 coelhos adultos, distribuídos em dois grupos experimentais, compondo oito animais por grupo. O grupo tratado foi medicado com 200µg/kg de doramectina por via oral, enquanto que no grupo controle foi administrado o mesmo volume de solução salina. O diagnóstico dos ácaros foi realizado com auxílio de microscópio estereoscópico. Foram coletados pelos das regiões do pescoço dorsal, lombar direita, lombar esquerda, cauda ventral e abdômen ventral para avaliação de L. gibbus e para P. ovis foi coletado cerúmen das orelhas com auxílio de zaragatoas. A avaliação da eficácia e a avaliação clínica das lesões, mensuradas em escores (grau 0 a 4), foi realizada nos dias 0, +3, +7, +14, +21, +28 e +35, após o tratamento. Foi observada eficácia de 75% e 87,5% no controle de L. gibbus nos dias +3 e +7 após o tratamento, sendo observada eficácia de 100% nos dias +14, + 21, +28 e +35. Foi observada eficácia de 100% no controle de P. ovis a partir do dia +7, permanecendo até o final do período observacional. O escore das lesões clínicas no grupo controle permaneceu de forma inalterada, exceto em um animal que piorou ao longo dos dias experimentais, enquanto nos animais do grupo tratado regrediu a partir do dia +3 e já no dia +21 após o tratamento, os animais apresentavam-se sem sinais da infestação por P. ovis. Nenhum animal do grupo tratado apresentou quaisquer efeitos colaterais secundários causados pela doramectina, que se mostrou uma ótima alternativa para o controle dos ácaros em coelhos naturalmente parasitados.(AU)

Eficacia de la doramectina vía intramuscular en nematodos gastrointestinales en equinos / Efficacy of Doramectin Via Intramuscular Injection in Gastrointestinal Nematodes in Horses / Eficácia da doramectina via intramuscular em nematóides gastrointestinais em equinos

El objetivo de esta investigación fue comprobar la efectividad de la doramectina vía intramuscular frente a los nematodos de equinos, al evacuarla según la reducción en el conteo de huevos por gramo de materia fecal (hpg). Para tal fin se utilizaron seis asnos y diez caballos mestizos de silla de diferentes sexos y edades, todos naturalmente infectados con nematodos gastrointestinales, los que aleatoriamente se dividieron en dos grupos: el 1 (control), tres asnos y cuatro caballos que no recibieron tratamiento antihelmíntico; y el 2 (tratados), tres asnos y seis caballos tratados con doramectina a dosis de 0,2 mg/kg vía intramuscular, dosis única, aplicada en la tabla del cuello. A los días 5, 12, 16, 24, 34, 41, 47, 56, 60 y 140 postratamiento se sometieron todos los animales a exámenes coprológicos, lo que permitió definir los valores de hpg por medio de la técnica de McMaster. Los resultados determinaron que la doramectina utilizada vía intramuscular fue altamente eficaz para controlar nematodos bajo condiciones de campo y en animales sometidos a continuas reinfestaciones.

This research aimed to test the effectiveness of doramectin by intramuscular administration against nematodes of horses, as it is evacuated, observed in the reduction in egg counts per gram of feces (epg). To this end, six donkeys and ten mestizo horses of different sexes and ages were used, all naturally infected with gastrointestinal nematodes. Animals were randomly divided into two groups: 1 (control), three donkeys and four horses that didn't receive anthelmintic treatment; and 2 (treated), three donkeys and six horses treated with doramectin at a dose of 0.2 mg/kg by intramuscular administration, single dose, applied on the neck. At days 5, 12, 16, 24, 34, 41, 47, 56, 60 and 140 post-treatment all animals were subjected to stool tests, allowing to define epg values by McMaster technique. The results determined that doramectin by intramuscular administration was highly effective in controlling nematodes in field conditions and in animals subjected to continual reinfestation.

O objetivo desta pesquisa foi comprovar a efetividade da doramectina via intramuscular frente a os nematóides de equinos, ao evacuá-la de acordo com a redução na contagem de ovos por gramo de fezes (hpg). Com esta finalidade foram utilizados seis asnos e dez cavalos mestiços de equitação de diferentes sexos e idades, todos naturalmente infectados com nematóides gastrointestinais, os que aleatoriamente se dividiram em dois grupos: o 1 (controle), três asnos e quatro cavalos que não receberam tratamento anti-helmíntico; e o 2 (tratados), três asnos e seis cavalos tratados com doramectina com dose de 0,2 mg/kg via intramuscular, dose única, aplicada no pescoço. Aos dias 5, 12, 16, 24, 34, 41, 47, 56, 60 e 140 pós-tratamento todos os animais foram submetidos a exames de fezes, fator que permitiu definir os valores de hpg por meio da técnica de McMaster. Os resultados determinaram que a doramectina utilizada por via intramuscular fosse altamente eficaz para controlar nematói-des sob condições de campo e em animais submetidos a contínuas re-infestações.

Eficácia da ivermectina oral no controle de Psoroptes ovis e Leporacarus gibbus em coelhos naturalmente infestados / Efficacy of oral ivermectin for control of Psoroptes ovis and Leporacarus gibbus in naturally infested rabbits

O objetivo do trabalho foi avaliar a eficácia da ivermectina administrada por via oral no controle de Psoroptes ovis e Leporacarus gibbus em coelhos naturalmente infestados. Foram selecionados 20 coelhos adultos, distribuídos na mesma proporção de ambos os sexos, em dois grupos experimentais, compondo dez animais por grupo. No grupo controle foi administrado o mesmo volume do tratamento de solução salina, enquanto o grupo tratado recebeu dose única de ivermectina oral (400 µg/Kg). O diagnóstico dos ácaros foi realizado com auxílio de microscópio estereoscópico após a devida coleta de material. Para P. ovis foi realizada através de coleta do cerúmen com auxílio de zaragatoas efetuadas nas orelhas e para por L. gibbus foi realizada coleta de pelos nas regiões do pescoço dorsal, lombar direita, lombar esquerda, cauda ventral e abdômen ventral. A avaliação da eficácia e a avaliação clínica das lesões, mensuradas em escores (grau 0 a 4) foi realizada nos dias 0, +3, +7, +14, +21, +28 e + 35, após o tratamento. Foi observada a eficácia de 100% no controle de P. ovis a partir do dia +7 e para L. gibbus a partir do dia +14, mantendo-se negativos até o final do período experimental. O escore da lesão das orelhas do grupo tratado regrediu a partir do dia +14 e no dia +21 todos os animais atingiram grau 0. No grupo controle, dois animais apresentaram aumento no escore da lesão das orelhas, um coelho apresentou aumento do escore de grau 1 para 2 e outro coelho de grau 3 para 4. Não foram observadas quaisquer reações adversas nos animais tratados. A ivermectina administrada por via oral em dose única foi eficaz no controle de P. ovis e L. gibbus em coelhos naturalmente infestados...

The aim of the study was to evaluate the efficacy of oral ivermectin in the control of Psoroptes ovis and Leporacarus gibbus in naturally infested rabbits. Twenty adult rabbits were selected; they were distributed in two groups with equal proportions of both sexes, containing ten animals per group. In the control group the same volume of the treatment was administered of saline solution, meanwhile the treated group received a single dose of oral ivermectin (400µg/kg). The diagnosis of the mites was made with a stereoscopic microscope, after the proper collection of material. For P. ovis it was performed by collecting of ear wax with swabs and for L. gibbus it was performed by collecting hairs in the dorsal part of the neck, lumbar right, lumbar left, ventral side of the tail and ventral abdomen. The evaluation of the efficiency and the clinical evaluation of the lesions, measured in scores (grade 0 to 4) was made in days 0, +3, +7, +4, +21, +28, and +35, after treatment. An efficiency of 100% was observed for P. ovis following day +7, and for L. gibbus following day +14, remaining negative until the final day of the study. The score of lesions in the ears of the treated group regressed following day +14 and on day +21 all animals reached a score of 0. In the control group, two animals presented an increase in ear lesion score, one rabbit presented an increase from score 1 to 2, and the other rabbit, from score 3 to 4. No adverse reactions were observed in the treated animals. The single dose administration of oral ivermectin was successful in the control of P. ovis and L. gibbus in naturally infested rabbits...

Suscetibilidade de larvas de Culex quinquefasciatus a diferentes inseticidas / Susceptibility of Culex quinquefasciatus larvae to different insecticides

INTRODUÇÃO: O presente estudo teve como objetivo avaliar a suscetibilidade de larvas de Culex quinquefasciatus a dois piretróides (Cipermetrina e Deltametrina), dois derivados da Avermectina (ivermectina e abamectina) e a um organofosforado (Temefós). MÉTODOS: Larvas de 3º e 4º instares de C. quinquefasciatus foram expostas a diferentes concentrações destes (onze repetições) seguindo o protocolo da Organização Mundial de Saúde. Uma hora após a exposição, as larvas foram lavadas em água desclorada, transferidas para recipientes plásticos contendo água sem cloro, alimentadas e observadas por períodos de 24h, até se transformarem em adultos. Para a determinação das concentrações letais, os valores foram submetidos à análise de regressão usando o modelo probit pelo programa Minitab 15. RESULTADOS: Diferenças entre as estimativas da CL50 e CL90 justificaram que a população de mosquitos testada apresenta heterogeneidade em resposta aos inseticidas, sendo a maior concentração utilizada para a CL50, a partir da análise de probit para o Temefós. Todos os inseticidas avaliados causaram mortalidade mais acentuada nas primeiras 24h exceto quando expostas à ivermectina. CONCLUSÕES: As larvas são suscetíveis a todos os inseticidas testados e há uma necessidade de um monitoramento dos inseticidas utilizados.

INTRODUCTION: This study aimed to assess the susceptibility of Culex quinquefasciatus larvae to two pyrethroids (Cypermethrin and Deltamethrin), two derivatives of Avermectin (Ivermectin and Abamectin) and an organophosphate (Temephos). METHODS: Third- and fourth-instar larvae of C. quinquefasciatus were exposed to different concentrations of insecticides (eleven repetitions) according to the World Health Organization's protocol. One hour after exposure, larvae were washed in dechlorinated tap water, transferred to plastic containers containing water without chlorine, fed and observed for periods of 24h until reaching adulthood. To determine lethal concentrations, the obtained values were submitted to regression analysis using the probit model with the Minitab 15 program. RESULTS: The highest concentration used for the LC50 from probit analysis was for Temephos. The evaluated insecticides caused more pronounced larvae mortality in the first 24h with the exception of those exposed to ivermectin. CONCLUSIONS: This study demonstrates that larvae are susceptible to all tested insecticides and that there is a need for monitoring the use of insecticides.

Sarna demodécica canina e suas novas perspectivas de tratamento- Revisão / Sarna demodécica canina y sus nuevas perspectivas de tratamiento- Revisión / Canine dermodicosis and new treatment perspectives: Review

A sarna demodécica canina, também chamada de demodicose canina ou demodicidose canina, é uma das dermatopatias mais comumente encontradas na clínica veterinária, sendo uma das mais sérias enfermidades encontradas nos cães.O tratamento pode ser insatisfatório e frustrante, fazendo com que muitos cães sejam submetidos a eutanásia, tanto em função da pouca eficácia dos acaricidas disponíveis, quanto de consecutivas recidivas. Atualmente, depois de mais de 20 anos de primazia do ectocida tópico amitraz como droga de eleição para tratamento de cães parasitados pelo Demodex canis, uma nova classe de fármacos de ação sistêmica vem ganhando a confiança dos clínicos e revolucionando conceitos terapêuticos. As lactonas macrocíclicas dividem-se em milbemicinas, como milbemicina oxima e moxidectina, e em avermectinas, como ivermectina, doramectina e abamectina. Algumas delas apresentam grande potencial, e há grande quantidade de relatos positivos sobre seu emprego. Entretanto, a falta de padronização para estudos sobre seu sucesso terapêutico limita a recomendação de protocolos definitivos, de forma que alguns ainda indicam opção primária pelo uso de amitraz, para só depois lançar mão de uma das lactonas macrocíclicas. Novos estudos e novas estratégicas para delineamento de protocolos terapêuticos, como oemprego de cálculos de extrapolação alométrica, podem contribuir grandemente para que essa linha de trabalho continue a evoluir, trazendo os esperados benefícios para médicos veterinários, clientes e pacientes.

Demodicosis, also named demodectic mange, is one of the most common dermatologic diseases in veterinary practice, and its generalized presentation is one of the most severe diseases in dogs. Therapy may be unsatisfactory and frustrating, causing the euthanasia of a lot of dogs because of acaricid inefficacy and consecutive recurrences. Nowadays, after more than 20 years of primacy of the topical ectocide amitraz as drug of choice for demodicosis, a new class of systemic drugs is gaining practitioners’ confidence and revolutionizing therapeutic concepts. Macrocyclic lactones are divided into mylbemycins such as mylbemycin oxime and moxydectin, and avermectins such as ivermectin, doramectin e abamectin. Some of them present great potential and there are a lot of positive reports with respect to their use. However, the lack of patterns for the study of their therapeutic success still limits the indication of definitive protocols, leading some clinicians to indicate the amitraz as their first option, making use of macrocyclic lactones at a later time. New studies and strategies in designing therapeutic protocols, as the use of allometric scaling calculations, may contribute decisively for the evolution of this working line, leading to the expected benefits for veterinarians, clients, and patients.

La sarna demodécica canina, también llamada demodicosis canina o demodicidosis canina, es una de las máscomunes dermatopatias encontradas en la clínica veterinaria, siendo una de las más serias enfermedades encontradas en losperros. El tratamiento puede ser insatisfactorio y frustrante, haciendo con que muchos perros sean sometidos a eutanasia,tanto en función de poca eficacia de los acaricidas disponibles, cuanto de consecutivas recidivas. Actualmente, después demás de 20 años de primacía del ectocida tópico amitraz como droga de elección para tratamiento de perros parasitados por el Demodex canis, una nueva clase de fármacos de acción sistémica viene ganando la confianza de los clínicos y revolucionando conceptos terapéuticos. Las lactonas macrocíclicas se dividen en milbemicinas, como milbemicina oxima y moxidectina, y en avermectinas, como ivermectina, doramectina y abamectina. Algunas de ellas presentan gran potencial, y hay gran cantidad de relatos positivos sobre su empleo. Entretanto, la falta de estandarización para estudios sobre su eficacia terapéutica limitala recomendación de protocolos definitivos, de manera que algunos aún indican opción primaria por el uso de amitraz, para solamente después emplear las lactonas macrocíclicas. Nuevos estudios y nuevas estratégicas para planteamiento de protocolos terapéuticos, como el empleo de cálculos de extrapolación alométrica, pueden contribuir grandemente para que esa líneade trabajo continúe a evolucionar, trayendo los esperados beneficios para médicos veterinarios, clientes y pacientes.

Effect of Avermectins on Expression of HSP70 mRNA in Rats Hepatic Tissue / 环境与健康杂志

Objective To understand the expression of heat shock protein(HSP70) mRNA induced by avermectins in the hepatic tissue of rats.Methods Wistar rats aged 6 weeks were randomly divided into 4 groups,12 in each including 6 male and 6 female.The rats in the experimental groups were treated with avermectins by gavage once a day at the doses of 2.5,1.25 and 0.625 mg/kg respectively for 14 consecutive days,one group was the negative control.The general state was concerned and after the exposure,the content of total protein(TP) in the serum was determined,the hepatic tissue was sampled to examine the expression of HSP70 mRNA by polymerase chain reaction(PCR).Results The content of TP in the serum in the 2.5 mg/kg group was lower than that in the control group(P